Tương tự, dung dịch 2 hợp chất thương mại FDME và DEHP ở nồng độ 1% và 2% (Wlá tươi/Vnước cất) được pha chế như Bảng 3.9. Mỗi hợp chất ở các nồng độ tương ứng được lọc bằng đầu lọc vi khuẩn với giấy lọc Ø = 0,2 μm trong điều kiện vô trùng. Kết quả, thu được dung dịch hợp chất ở nồng độ tương ứng trong điều kiện vô trùng và được sử dụng để khảo sát ức chế vi khuẩn Xoo ngay sau đó.
Chuẩn bị huyền phù vi khuẩn Xoo 109 CFU/mL dùng để khảo sát ức chế trên địa thạch được chuẩn bị như sau: dùng que cấy vô trùng lấy đầy 2 loop vi khuẩn đã phát triển trên môi trường Wakimoto từ 48 giờ cho vào 10 mL nước cất đã thanh trùng. Huyền phù vi khuẩn được đo quang phổ ở bước sóng 600 nm và hiệu chỉnh về giá trị hấp thụ quang phổ về 0,37 (Khoa, 2005; Khoa et al., 2017). Huyền phù vi khuẩn này được sử dụng ngay sau đó.
Thí nghiệm được tiến hành bằng cách trải đều 50 μl huyền phù Xoo mật số 109 CFU/ml lên đĩa petri chứa môi trường Wakimoto bằng que tam giác. Sau đó, đục 5 lỗ đường kính 6 mm trên đĩa thạch để tạo thành 5 giếng. Bố trí các giếng trên mỗi đĩa thạch như sau: Giếng 1, 2 và 3: mỗi giếng 20 μl cao tổng hoặc cao phân đoạn hoặc hợp chất ở nồng độ 1% hoặc 2%. Giếng 4: đối chứng âm, 20 μl nước cất thanh trùng. Giếng 5: đối chứng dương, 20 μl dung dịch CuSO4 1 M.
Sau đó đĩa thạch được giữ ở điều kiện nhiệt độ phòng (28 ± 1oC). Sau 72 giờ quan sát và đo đường kính vòng vô khuẩn tạo ra bởi các nghiệm thức do sự ức chế trực tiếp sự phát triển của vi khuẩn Xoo.