Khóa luận Phát triển các fluorescent atp sensor sử dụng tiểu đơn vị epsilon của phân tử f 1 -Atpase/synthase và các biến thể của green fluorescent protein
- Người chia sẻ :
- Số trang : 67 trang
- Lượt xem : 8
- Lượt tải : 500
- Tất cả luận văn được sưu tầm từ nhiều nguồn, chúng tôi không chịu trách nhiệm bản quyền nếu bạn sử dụng vào mục đích thương mại
Bạn đang xem trước 20 trang tài liệu Khóa luận Phát triển các fluorescent atp sensor sử dụng tiểu đơn vị epsilon của phân tử f 1 -Atpase/synthase và các biến thể của green fluorescent protein, để xem tài liệu hoàn chỉnh bạn click vào nút DOWNLOAD LUẬN VĂN ở trên
Đề t ài “Phát triển các fluorescent ATP sensor, sử dụng tiểu đơn vị Epsilon của phân tử F1-ATPase/synthase và các biến thể của green fluorescent protein” đƣợc thực hiện tại phòng thí nghiệm của Giáo sƣ Noji Hiroyuki, Institute of Scientific and Industrial Research (ISIR), Đ ại h ọc Osaka, Nhật B ản; thời gian t ừ tháng 10 năm 2006 đến tháng 8 năm 2007. T rong đ ề tài này, các ATeam là phức hợp của CFP nối v ới ti ểu đơn vị t ừ Escherichia coli (EF1 ), Bacillus clausii (BCL ), Bacillus megaterium (BME ), Bacillus pseudofirmus (BPF ) và monomeric Venus ho ặc các circular permutated Venus, đƣợc tạo ra bằng kỹ thu ật sinh h ọc phân t ử. Theo k ết qu ả đánh giá các cấu trúc này in vitro , BME có ái lực với ATP ở mức millimole. Trong khi đó, BCL và BPF có ái l ực với ATP trong kho ảng vài trăm micromole. Tuy nhiên, ATeam với EF1 và BPF có đáp ứng rất th ấp với ATP. Nồng đ ộ ATP trong t ế bào đƣợc cho là nằm trong khoảng dƣới millimole đ ến vài millimole nên các ATeam với BME và BCL có th ể đƣợc s ử dụng để xác đị nh nồng độ ATP trong tế bào sống. Trong s ố các ATeam từ BME thì ATeam BME – cp173Venus là ATP sensor tốt nh ấ t. ATeam này có hằng số phân ly đối v ới ATP và Hill coefficient l ần lƣợt là K ’ d = 3,36 và n = 2.04. ATeam BCL- nVenus có hằng số phân ly đối v ới ATP K ’ d = 4,12.10 5 và Hill coefficient n = 2,2. Song, ATeam này luôn tồn tại dƣ ới hai d ạng: đơn phân tử và đa phân tử. D ạ ng đa phân tử có ái lực rất th ấp với ATP. Đ ể lo ại b ỏ hiện tƣợng đa phân tử, các đ ột bi ến thay thế amino acid trong phân t ử BCL nhƣ I9T/V42K/F67N/L78N, P85A, I9T/V42K/F67N/L78N/P85A đã đƣợc thử nghiệm nhƣng không hiệu quả.
