Luận văn Ứng dụng phương pháp PRC phát hiện edwardsiella ictaluri trực tiếp từ mô cá bệnh

  • Người chia sẻ :
  • Số trang : 53 trang
  • Lượt xem : 8
  • Lượt tải : 500
  • Tất cả luận văn được sưu tầm từ nhiều nguồn, chúng tôi không chịu trách nhiệm bản quyền nếu bạn sử dụng vào mục đích thương mại

NHẬP MÃ XÁC NHẬN ĐỂ TẢI LUẬN VĂN NÀY

Nếu bạn thấy thông báo hết nhiệm vụ vui lòng tải lại trang

Bạn đang xem trước 20 trang tài liệu Luận văn Ứng dụng phương pháp PRC phát hiện edwardsiella ictaluri trực tiếp từ mô cá bệnh, để xem tài liệu hoàn chỉnh bạn click vào nút DOWNLOAD LUẬN VĂN ở trên

Đề tài thực hiện nhằm chuẩn hóa phương pháp ly trích ADNt ừmô thậncủa cá tra theo phương phápcủa T aggart et al. (1992) vàtối ưu hóa phương pháp PCR phát hiện E. ictaluri. Qui trình ly trích ADN được chuẩn hóa có thời gianthực hiệnbằng 1/8lần qui trìnhgốc (T aggart et al, 1992)với hàmlượng Proteinase Ksửdụng là 2.5ml (40mg/ml), thời gian ủ ởbước 1 là 15 phút; hàmlượng RNase là 2.5ml (2mg/ml), thời gian ủbước 2 là 30 phút. Qua thí nghiệm xác định được độ nhạy đốivới ADN chiết tách trực tiếptừ thận có hàmlượng là 50ng,với ADN chiết táchtừ vi khuẩn có hàmlượng 0.2 ng.Hai đoạnmồi EiFd-1 và EiRs-1 được xác định là đặc hiệuvới vi khuẩn E. ictaluri. Ngoài ra trong quá trình chuẩn hóa thay đổi hàmlượng T ag DNA polymerasetừ 5U/ml xuống còn 3U/ml. Thực hiện phản ứng PCRvới ADN được chiết tách trực tiếptừ thậnvới qui trình đã đượctối ưu, phương pháp PCR đãchuẩn hóa phát hiện E. ictaluri ởvị trí407bp.