Nghiên cứu đã tiến hành 3 đợt thu mẫu máu và ruột cá tại 3 thời điểm (Hình
2.6) bằng cách thu ngẫu nhiên 3 con/bể/mẫu máu (tương ứng 3 mẫu máu/nghiệm
thức). Ở thời điểm sau 28 ngày nuôi (tức trước khi cảm nhiễm), số ượng mẫu máu
được thu cũng à 3 mẫu (mặc dù bố trí 6 bể/nghiệm thức) để phù hợp số ượng mẫu
máu thu vào hai thời điểm 5 và 10 ngày sau cảm nhiễm. Các mẫu máu này dùng để
đánh giá chỉ tiêu huyết học và một số chỉ tiêu miễn dịch. Sau khi thu mẫu máu, mẫu
ruột tiếp tục được thu bằng chọn ngẫu nhiên 1 trong 3 con cá đã d ng để thu mẫu
máu (tương ứng 3 mẫu ruột/nghiệm thức).
Qua tham khảo các thời điểm thu mẫu máu tại các nghiên cứu đã công bố
(Đặng Thị Hoàng Oanh và ctv, 2012a; Doan và ctv 2019; ) các thời điểm được
chọn để thu mẫu máu và mẫu ruột gồm:
– Thời điểm 1: ngay trước khi cảm nhiễm vi khuẩn (tức là thời điểm sau 28
ngày nuôi, hay 0 ngày cảm nhiễm);
– Thời điểm 2: 5 ngày sau khi cảm nhiễm với vi khuẩn.
– Thời điểm 3: sau 3 ngày liên tục cá ở tất cả các nghiệm thức ngưng chết (Hồ
Thu Th y và ctv, 2019). Trong trường hợp cá ở tất cả các nghiệm thức chưa ngưng
chết tại mốc thời gian kết thúc thí nghiệm (14 ngày sau khi cảm nhiễm với vi
khuẩn), thì sẽ tiến hành thu mẫu máu, mẫu ruột vào ngày thứ 14.
Tại Thời điểm 1, toàn bộ các nghiệm thức được thu mẫu máu và ruột. Còn tại
các Thời điểm 2 và 3, các mẫu ở toàn bộ các nghiệm thức c a nhóm 2 và 3 được
thu, riêng nhóm 1 chỉ mẫu ở nghiệm thức 1.2 được thu (do mục tiêu c a nghiên cứu
là khảo sát ảnh hưởng c a cao chiết trong việc hỗ trợ nâng cao sức đề kháng, miễn
dịch c a cá khi tiếp xúc với tác nhân gây bệnh). Ngoài ra, trong thời gian 14 ngày
sau khi gây cảm nhiễm với vi khuẩn S. agalactiae, tiến hành theo dõi, ghi nhận số
cá chết, tình trạng sức khỏe c a cá hàng ngày.
 Thu mẫu máu: cá được gây mê bằng dung dịch A-QUI S trước hi ấy mẫu.
Tiến hành au sạch và sát huẩn bằng cồn 70% tại vị trí ấy máu sau đó sử dụng
ống ti m tiệt tr ng dung tích 1 m ti m vào động mạch ch (ở dưới cột sống thân
sau) c a cá để ấy máu. Cho ượng máu đã rút vào ống eppendorf có tráng chất
háng đông EDTA rồi đảo nhẹ ống và giữ ở nhiệt độ hoảng 4oC.
 Thu mẫu thận: sau hi ấy mẫu máu tiến hành mổ hoang bụng cá để ấy
mẫu thận. Mô thận ngay ập tức được ngâm vào ống eppendorf 5 m có chứa 2 5 m
môi trường nuôi cấy RPMI.