Chuẩn bị tế bào khả biến:
Tế bào E.coli DH5α được cấy ria trên môi trường LB đặc và nuôi qua đêm ở 37oC. Chọn một khuẩn lạc nuôi cấy trong 5 ml LB lỏng, lắc 200 v/p, ở 37oC, qua đêm. Hút 1% dịch khuẩn ở trên cho vào 50 ml LB lỏng, lắc 200 v/p, ở 37oC, trong 2-3 giờ, đo OD600 đạt 0,4 – 0,6 thì chuyển dịch nuôi cấy sang ống ly tâm, để 15 phút ở trong đá (hoặc ở 4oC). Ly tâm 4000 v/p, ở 4oC, trong 5 phút. Thu cặn và hoà tan trong 30 ml CaCl2 0,1M, để trong đá 15 phút, sau đó ly tâm 4000 v/p, ở 4oC, trong 5 phút (lặp lại ba lần, để trong đá lần thứ hai 30 phút, lần thứ ba 60 phút). Đổ dịch CaCl2, hòa tan trong 1ml CaCl2/100 ml LB ban đầu. Bổ sung 15-20% glycerol. Chia 50 μl dịch tế bào khả biến vào mỗi ống eppendorf 1,5 ml. Bảo quản tế bào khả biến trong tủ lạnh -80oC.
Biến nạp:
Tế bào khả biến được lấy ra từ tủ -80oC và được làm tan trên đá. Bổ sung 5 μl vectơ đã gắn gen vào ống đựng tế bào khả biến và trộn nhẹ. Hỗn hợp được đặt trong đá 10-15 phút, rồi được chuyển sang bể ổn nhiệt có nhiệt độ 42oC trong 1 phút 30 giây. Sau đó mẫu được lấy ra và đặt ngay lên đá lạnh trong 5 phút. Bổ sung 500 μl môi trường LB lỏng, hỗn hợp được nuôi ở 37oC, lắc 200 v/p trong 1 giờ. Sử dụng que cấy trải, trải 100-200 μl dịch khuẩn lên đĩa môi trường LB đặc có chứa 50 mg/L carbenicillin. Ủ đĩa ở 37oC qua đêm.