Để thăm dò ảnh hưởng của thời gian nuôi cấy đến hoạt tính pectinase chúng tôi tiến hành nuôi cấy các chủng nấm mốc đã được tuyển chọn trong môi trường Czapek-pectin dịch thể. Sau những khoảng thời gian nhất định (24 giờ) thu dịch lọc, sinh khối và dịch enzyme để xác định hoạt tính và hoạt độ pectinase. Kết quả được thể hiện trong Hình 3.6, 3.7 và 3.8 cho thấy chủng A. oryzae M1 và A. oryzae M45 tại thời điểm 24 giờ nuôi cấy chưa tích lũy sinh khối, sơ tuyển gián tiếp chưa xuất hiện đường kính vòng phân giải cũng như hoạt độ pectinase. Trong khi đó chủng A. niger M13 đã thể hiện khả năng thủy phân pectin và bắt đầu tích lũy sinh khối. Do vậy, chúng tôi không xác định sinh khối khô, đường kính vòng phân giải, hoạt độ pectinase tại thời điểm 24 giờ đối với hai chủng A. oryzae M1 và A. oryzae M45.
Qua khảo sát ảnh hưởng của thời gian nuôi cấy đến hoạt tính pectinase của bốn chủng nấm mốc cho thấy, chủng A. oryzae M1 cho hoạt tính pectinase và tích lũy sinh khối cực đại tại thời điểm 72 giờ nuôi cấy (đường kính vòng phân giải 36,3 mm, sinh khối khô đạt 9,2 mg/mL), hoạt độ 126,0 U/mL. Sau 72 giờ nuôi cấy thì hoạt tính pectinase cũng như sinh khối bắt đầu giảm dần. Chủng A. niger M13 thể hiện khả năng thủy phân pectin và tích lũy sinh khối cực đại tại thời điểm 48 giờ nuôi cấy (đường kính vòng phân giải đạt 32,3 mm, sinh khối khô đạt 7,8 mg/mL), hoạt độ pectinase là 35,6 U/mL. Tại thời điểm 72 giờ nuôi cấy thì hoạt độ pectinase cũng như sinh khối nấm mốc bắt đầu giảm mạnh. Chủng A. oryzae M45 có hoạt tính và hoạt độ pectinase đạt cực đại tại 120 giờ nuôi cấy (đường kính vòng phân giải 30,8 mm; sinh khối khô đạt 6,6 mg/mL; hoạt độ 115,1 U/mL).
Hoạt tính tối ưu của pectinase có thể thay đổi tùy thuộc vào chủng nấm phân lập, phương pháp lên men, thành phần sinh trưởng, môi trường, nồng độ nguồn dinh dưỡng và mô hình sản xuất pectinase [77]. Castilho và cs (2000) đã báo cáo rằng polygalacturonase cao nhất hoặc hoạt tính pectinase từ A. niger thu được sau 22 giờ của thời gian lên men [48].